通用PCR試劑盒

簡要描述：通用PCR試劑盒適用于各種 RNA制品的反轉錄反應以及隨后的PCR擴增。通用PCR試劑盒它采用M-MLV進行反轉錄反應，能夠獲得較長的反轉錄產物。同時，在20ul反轉錄體系和50ul PCR反應體系中，還可以一次性得到足夠量的PCR產物用于后續的克隆實驗。

產品型號：

所屬分類：PCR試劑盒

更新時間：2024-12-31

詳細說明：

通用PCR試劑盒

本試劑盒適用于各種 RNA制品的反轉錄反應以及隨后的PCR擴增。它采用M-MLV進行反轉錄反應，能夠獲得較長的反轉錄產物。同時，在20ul反轉錄體系和50ul PCR反應體系中，還可以一次性得到足夠量的PCR產物用于后續的克隆實驗。本試劑盒中配制的酶均為進口的酶。RT酶采用進口的M-MLV，所以cDNA更長，基因的信息保留得更完整！反轉錄過程中特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測等分子生物學實驗。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)產品簡介

莫洛尼鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MLV RT）是一種RNA依賴的DNA聚合酶，能使mRNA（>5kb）轉錄為cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相對于禽成髓細胞瘤病毒反轉錄酶較弱，更適合用來反轉錄較長的mRNA。M-MLV RT應用于以RNA為模板合成cDNA的一條鏈。

注意：M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反轉錄酶，因此要得到和用AMV 反轉錄酶一樣產量的cDNA需加入更多單位的M-MLV反轉錄酶。

通用RT-PCR試劑盒使用方法

1）使用方法簡介以用2mg總RNA為例。在無RNase離心管中，加入0.5mg引物至含總RNA的樣品中，總體積不大于15ml。70℃，5分鐘打開模板鏈形成的二級結構。立即放于冰上降溫防止二級結構恢復，隨后短暫離心使液體集中在離心管底。

2）加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。

注意：不要改變引物的加入比率。

通用PCR試劑盒常見問題與解決方法:

常見問題	可能原因	解決方法
陽性對照、待測樣本均無條帶。	PCR反應體系或反應條件不合適。	使用梯度PCR摸索PCR反應條件。
	PCR試劑保存不當失去活性。	2× PCR Mix應保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
	引物設計問題。	嘗試重新設計引物進行檢查。
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。	不當儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。	使用新鮮的試劑。
	加入組織裂解液過量。	增大反應體系，或減少裂解液的用量。
	樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經降解。	裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。
	模板加入量不適合。	在反應體系10-20%范圍內優化模板加入量。反應效性能較差時，可以降模板濃度調節到低于10%的范圍。
	PCR循環數不足。	適當增加PCR的循環數，推薦在35-40循環為佳。因為模板復雜，一般PCR反應要比用純化的 DNA模板多5-10個循環為佳。
非特異性擴增	PCR退火溫度太低，循環數、引物濃度或模板濃度太高。	增加PCR退火溫度，降低PCR循環數、引物濃度或模板濃度。
	PCR引物錯配。	重新設計PCR引物。
	配制PCR反應體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。	PCR反應體系的配制在低溫下進行，配制完成后盡快進行PCR擴增反應。
陰性對照出現目的條帶	操作工具或試劑污染。	實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。
陰性對照出現目的條帶	樣本間交叉污染。	每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。